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ELISAS實驗血清的制備
更新時間:2013-11-19 點擊次數(shù):1955次

ELISAS實驗血清的制備

(2)抗血清的制備

 ① 所需的抗原量   一般1-10mg/mL。

②免疫途徑   抗原的注射方法有皮下注射、肌肉注射、腹膜內(nèi)注射、靜脈注射和淋巴結(jié)注射等。其中以靜脈注射zui為簡單方便,不需要佐劑乳化,產(chǎn)生抗體的高峰值出現(xiàn)較早,一般在一周左右,注射后一周即可采血測試效價。免疫過程中應(yīng)注意:a.佐劑只能現(xiàn)配現(xiàn)用:b.采血時間不宜拖得太長。因為免疫時間越長,產(chǎn)生交叉反應(yīng)的抗體也越多。

③抗血清的分離   當(dāng)?shù)玫綕M意的效價時,即可進行取血。將收集到的血液成斜面放置在37℃、溫箱中2h。然后置于4℃冰箱過一夜。次日用滴管吸取抗血清,用離心法(2000-3000r/min,20min)去掉沉淀。然后測定效價、鑒定純度。純度用紫外分光光度計或Folin氏比色法進行測定。抗血清保存于-25℃低溫處。

 ④抗血清的效價測定    測定的方法一般有兩種,即試管沉淀法和免疫雙擴散法。對于免疫酶技術(shù)使用的抗血清,必須具有一定的效價,試管沉淀法應(yīng)不低于1:2,免疫雙擴散法不低于1:2,且要求單價抗血清。

 (3)捕食者的收集和準(zhǔn)備     主要方法有3個:①將胃內(nèi)含物擠在質(zhì)量好的濾紙上,但蛋白質(zhì)易與纖維素結(jié)合,若保存過久則難以洗脫:②將待檢查的捕食封閉在明膠膠囊內(nèi),并加干燥劑,以使蟲體與膠囊分離:③盡可能快地將采集到的捕食者儲存于低溫下(如-40℃)。前兩種方法適于郵寄和長途運輸,后一種方法能保存較長的時間。所有的方法都需保持干燥。對較大的捕食者,可將消化道分離,像蟻、蝸牛以及蜘蛛等小型動物則整個蟲體。(4)酶聯(lián)抗體的制備  按戊二醛簡易法進行。


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