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土壤酸性轉化酶 (S-AI) 活性檢測試劑盒

提 供 商: 上海研謹生物科技有限公司 資料大?。?/td>
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詳細介紹

壤酸性轉化酶 (S-AI) 活性檢測試劑盒

見分光光度法

意:正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

規(guī)格:50T/24S

產(chǎn)品內容

一:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;

試劑二:×1 瓶,4℃保存;臨用前加入 25mL 試劑一充分溶解備用;用不完的試劑 4℃保存; 試劑三液體 20mL×1 瓶,4℃保存。

標準品:粉劑×1 支,4℃保存,10mg 無水葡萄糖。臨用前加入 1mL 試劑一溶解,制備 10mg/mL 萄糖標準液備用。

產(chǎn)品說明

S-AI  pH 為 4.5~5.0  (酸性) 條件下催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖,是土壤微生物蔗 糖代謝關鍵酶之一

S-AI 催化蔗糖降解產(chǎn)生還原糖,進一步與 3,5-二硝基水楊酸反應,生成棕紅色氨基化合物 在 540nm 有特征光吸收,在一定范圍內 540nm 光吸收增加速率與 AI 活性成正比。

試驗中所需的儀器和試劑:

分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水、甲苯。

作步驟:

、樣品處理:

新鮮樣自然風干或 37℃烘箱風干,過 30~50  目篩。

、測定步驟及加樣表:

、光光度計/酶標儀預熱 30min ,波長調至 540nm ,蒸餾水調零。

、標準液的稀釋:將 10mg/mL 葡萄糖標準液用試劑一稀釋至 、、、、0.8 0.6 mg/mL 葡萄糖標準溶液備用。

、加樣表:

劑名稱

定管

對照管

準管

白管

土樣 (g)

0.1

0.1

-

-

劑一 (μL)

-

800

-

800

劑二 (μL)

800

-

-

-

準液 (μL)

-

-

800

-

甲苯 (μL)

20

20

20

20

混勻,37℃準確水浴 1h 后,煮沸 10min 左右 (蓋緊,以防止水分散失) ,流水或冰浴冷

 


 

 

 

卻后充分混勻 (以保證濃度不變) ,10000rpm,常溫離心 10min,取上清 150μL 與 600μL  劑一混合即將上清液稀釋 5 倍。

上清稀釋液 (μL)

700

700

700

700

劑三 (μL)

300

300

300

300

,煮沸 10min 左右 (蓋緊,以防止水分流失) ,流水冷卻后充分混勻,540nm 處蒸餾水調

,記錄各管吸光值A ,記為 A 測定管、A 對照管、A 標準管、A 空白管。計算ΔA=A 測定管-A 對照 ΔA 標準=A 標準管-A 空白管。

三、S-AI 活性計算:

1 、  標準曲線的繪制:

萄糖濃度為 x 軸,相應的ΔA 標準為 y 軸,繪制標準曲線,得到標準方程 y=kx+b;將ΔA  式得到 x  mg/mL)

2 、  S-AI 活性計算

單位義:37℃每 g 土壤每天產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為一個酶活性單位。

S-AI  (U/g=x×V 酶促÷W÷T

V 酶促:酶促反應總體積,0.820mLW:樣本鮮重,g;T:反應時間:1/24d

注意事項:

1 、如果加入試劑三,煮沸 10min 后有混濁物出現(xiàn),建議離心除去沉淀 (10000rpm ,2min ) ,取上 測定吸光度;

如果吸光值大于 ,可以將上清液再進行稀釋;若吸光值較小,可以減少上清液稀釋倍數(shù)。兩種 作均要注意改變公式中的稀釋倍數(shù)。


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