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組織總磷含量測定試劑盒說明書

提 供 商: 上海研謹(jǐn)生物科技有限公司 資料大小:
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貨號: YJS2421                                                   規(guī)格:50管/48樣

組織總磷含量測定試劑盒說明書

可見分光光度法

注意:正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義:

磷的存在形態(tài)包括無機(jī)磷與有機(jī)磷。無機(jī)磷主要指磷酸根,參與生物體內(nèi)多種代謝,包括能量代謝、核酸代謝、蛋白質(zhì)磷酸化和脫磷酸化等。通過測定總磷與無機(jī)磷含量即可了解作物對磷的利用率,進(jìn)而為合理施肥提供依據(jù)。

測定原理:

總磷經(jīng)消化后,轉(zhuǎn)化成無機(jī)磷。鉬藍(lán)法是測定無機(jī)磷含量的經(jīng)典方法,一定條件下,鉬藍(lán)與磷酸根生成660nm有特征吸收峰的物質(zhì),通過測定660nm光吸收,即可計算無機(jī)磷含量,進(jìn)而可計算出組織中總磷含量。

自備儀器和用品:

可見分光光度計、離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1ml玻璃比色皿、蒸餾水和濃硫酸。

試劑組成和配置:

試劑一:液體×1 瓶,4℃保存) (強(qiáng)腐蝕性,強(qiáng)氧化性)。

試劑二:液體×1 瓶,4℃保存。

試劑三:粉劑×1 瓶,4℃避光保存。臨用前配制,加入15mL蒸餾水,溶解后再加入10mL

試劑二,混勻。

標(biāo)準(zhǔn)品:液體×1 支,20μmol/L 無機(jī)磷標(biāo)準(zhǔn)液,-20℃保存。

有機(jī)磷消化:

取帶蓋試管,進(jìn)入精確稱取的約0.1 g組織,加濃硫酸1.0 mL,蓋緊(防止水分散失)后沸水浴10min左右,待溶液呈黑色或棕色時取出。稍冷后,加試劑一200μL,充分混勻,蓋緊后繼續(xù)沸水浴,直到溶液呈透明狀,取出室溫冷卻后,加蒸餾水8.8mL,充分混勻;室溫,8000g,離心10min,取上清液待測。

測定操作:

1. 分光光度計預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長到660nm,蒸餾水調(diào)零。

2. 打開水浴鍋,調(diào)節(jié)溫度到40℃。

3. 空白管:取EP管,依次加入500μL蒸餾水,500μL試劑三,混勻后置于40℃水浴保溫10min,室溫冷卻10min后于660nm測定吸光度,記為A空白管。

4. 標(biāo)準(zhǔn)管:取EP管,依次加入50μL標(biāo)準(zhǔn)液,450μL蒸餾水,500μL試劑三,混勻后置于40℃水浴保溫10min,室溫冷卻10min后于660nm測定吸光度,記為A標(biāo)準(zhǔn)管。

5. 測定管:取EP 管,依次加入50μL上清液,450μL 蒸餾水,500μL試劑三,混勻后置于40℃水浴保溫10min,室溫冷卻10min 后于660nm測定吸光度,記為A測定管。

注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。

 

 

組織總磷含量計算公式:

1) 按照蛋白含量計算

總磷含量(mmol/mg prot) = [C 標(biāo)準(zhǔn)液×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)]×V 總÷Cpr= 1×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷W

2) 按照樣本質(zhì)量計算

總磷含量(mmol/g )= [C 標(biāo)準(zhǔn)液×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)]×V 總÷W= 1×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷W

C 標(biāo)準(zhǔn)液:1 mmol/L;V 總:上清液總體積,10 mL=0.01 L;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;

W:樣品質(zhì)量,g。

注意事項:

1. 試劑三需臨用前配制,并且當(dāng)天使用完畢。

2. 40min內(nèi)完成比色。

3. 最DI檢出限為10μmol/L。

實驗代做服務(wù):

 


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