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炭疽桿菌(BA)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR 法)

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詳細(xì)介紹

炭疽桿菌(BA)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR )

【產(chǎn)品名稱】

將步驟 1 提取的 DNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL,分別加入相應(yīng)的反

應(yīng)管中,蓋好管蓋,勻,短暫離心。

通用名稱:炭疽桿菌(BA)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR )

Name

Bacillus Anthracis Detection Kit (Real-Time PCR Method)

4  擴增(核酸擴增區(qū))

4.1 將待檢測反應(yīng)管于熒光定量  PCR  儀反應(yīng)槽內(nèi);

4.2 設(shè)好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)25μL;

熒光通道選擇:  檢測通道(Reporter DyeFAM, 淬滅通道(Quencher Dye

NONEABI 系列儀器請勿選擇 ROX 比熒光,選擇 None  即可。

【包裝規(guī)格】48T/

【預(yù)期用途】

炭疽是由炭疽桿菌(Bacillus Anthracis, BA)感染引起的一種人獸共患病。BA

在環(huán)境中形成芽孢,可長期、穩(wěn)定地存在于自然界中。由于 BA  的穩(wěn)定性及其致

病性,易引發(fā)突發(fā)公共衛(wèi)生事件。目前的 BA  檢測方法主要基于病原體的培養(yǎng)、染色

鏡檢、血清學(xué)檢測等,但這些方法均適合早期的快速偵檢?;诤怂釞z測的熒光-PCR

技術(shù),因其靈敏度高、操作簡單、特異性好,可快速檢測炭疽病原,及時控制炭疽疫

4.3  推薦循環(huán)數(shù)設(shè)

步驟

循環(huán)數(shù)

溫度

95

94℃

55

時間

收集熒光信號

1

1 cycle

10min

15sec

30sec

[1]

2

40 cycles

本試劑盒適用于檢測皮膚水泡液、咽拭子、可疑食物等樣本中的炭疽桿菌,用于

炭疽桿菌感染的輔助診斷。

5  結(jié)果分析判定

6.1結(jié)果分析條件設(shè)定

【檢驗原

[2-3]

,用熒光 PCR  技術(shù)對炭疽

設(shè) Baseline Threshold:一般直接按機器自動分析的結(jié)果分析,當(dāng)曲線出現(xiàn)

整體傾斜時,根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline start (一般可在 3~15  范圍內(nèi)調(diào)

節(jié))、stop (一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),以及 Threshold Value (上下拖動

閾值線至高于陰性對照),新分析結(jié)果。

本試劑對炭疽桿菌特異性基因設(shè)計引物和熒光探針

桿菌的核酸進(jìn)行體外擴增檢測,用于臨床上對可疑感染者的病原學(xué)診斷。

【試劑組成】

7結(jié)果判斷

核酸提取液

酶液

1.5mL×2  管

50μL×1 管

1.0mL×1 管

50μL×1 管

250μL×1 管

陽性:檢測通道 Ct 值≤35.0,丏曲線有明顯的指數(shù)增長曲線。

可疑:檢測通道 Ct >35.0,丏出現(xiàn)明顯擴增曲線的樣本建議復(fù)試驗,復(fù)試

驗結(jié)果出現(xiàn) Ct 值≤35.0  和明顯擴增曲線者為陽性,否則為陰性。

陰性:樣本檢測結(jié)果無 Ct  值丏無明顯的擴增曲線。

BA  反應(yīng)液

BA  陽性質(zhì)控品

陰性質(zhì)控品

8 檢測方法的局限性

注:

1同批號試劑用。

Ø  樣本檢測結(jié)果不樣本收集、處、運送以及保存質(zhì)量有關(guān);

Ø  樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會出現(xiàn)假陽性結(jié)果;

Ø  陽性對照、擴增產(chǎn)物泄漏,會導(dǎo)致假陽性結(jié)果;

Ø  病原體在流行過程中基因突變、組,會導(dǎo)致假陰性結(jié)果;

Ø  同的提取方法存在提取效率差異,會導(dǎo)致假陰性結(jié)果;

Ø  試劑運輸,保存當(dāng)或試劑配制準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降,出現(xiàn)假陰性或定

量檢測準(zhǔn)確的結(jié)果;

2)試劑盒內(nèi)各試劑組份足夠包裝規(guī)格所標(biāo)示的檢測次數(shù)。

【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存、運輸、反復(fù)凍融數(shù)超過 5 次,有效期 12  個月。

【適用儀器】

ABI  、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf  等系列

熒光定量 PCR  檢測儀。

Ø  本檢測結(jié)果僅供考,如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。

9.  質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

【標(biāo)本采集】

陰性質(zhì)控品:無明顯擴增曲線或無 Ct  值顯示;

陽性質(zhì)控品:擴增曲線有明顯指數(shù)生長期,丏 Ct  值≤32;

以上條件應(yīng)同時滿足,否則實驗視為無效。

皮膚炭疽,取水泡液 1mL;肺炭疽,采集咽拭子標(biāo)本,放入標(biāo)本采集管中;腸炭

疽,取糞便  1g

【保存和運輸】

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,長期保存可-70℃,但能超過 6  個月,標(biāo)本

運送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運輸,嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

【注意事項】

Ø  所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行;

Ø 試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,*并短暫離心;

Ø  反應(yīng)液應(yīng)避光保存;

【使用方法】

1.  樣品處(樣本處區(qū))

Ø 反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;

Ø  使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)與用工作服;

Ø 樣本處、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行,以免交叉污染;

Ø 實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處工作臺和移液器;

Ø  試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待,并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全通

則》進(jìn)行處。

 

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