豬瘟病毒ELISA抗體檢測試劑盒說明書
【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：豬瘟病毒抗體診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名稱：Diagnostic Kit For Classical Swine Fever Virus Antibody（CSFV Ab）,ELISA
【規(guī)格】
96T×2/盒
【用途】
用于檢測豬血清中豬瘟病毒抗體，適用于對豬場豬瘟疫苗免疫狀況的評價(jià)以及感染豬的血清學(xué)診斷。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒應(yīng)用固相酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）原理，由包被有高純度的豬瘟病毒重組抗原的微孔反應(yīng)板、辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗豬IgG及其它試劑配套組成。其反應(yīng)機(jī)理為包被抗原與樣本中的CSFV-Ab結(jié)合，再與酶標(biāo)抗豬IgG抗體形成“包被抗原+CSFV-Ab+酶標(biāo)抗豬IgG抗體"復(fù)合物，加入顯色劑，通過酶催化反應(yīng)顯色。顯色深淺與CSFV-Ab的量成正比，當(dāng)樣本反應(yīng)顯色后，經(jīng)酶標(biāo)儀檢測所得結(jié)果超過設(shè)定的臨界值時(shí)結(jié)果判為陽性，即表明免疫產(chǎn)生了抗體或有自然感染存在。
【主要組成成份】
1 | CSFV抗原包被板 | 96T×2 | |
2 | 酶標(biāo)記物 | 22ml | 黃色帽 |
3 | 樣本稀釋液 | 50ml | 透明帽 |
4 | CSFV-IgG陰性對照血清 | 1.5ml | 綠色帽 |
5 | CSFV-IgG陽性對照血清 | 1.5ml | 紅色帽 |
6 | 顯色劑 | 12ml×2 | 橙色帽 |
7 | 終止液 | 12ml | 藍(lán)色帽 |
8 | 20X濃縮洗滌液 | 50ml | 白色帽 |
9 | 蓋板膜 | 2張 | |
10 | 說明書 | 1份 | |
【自備器材】
1．酶標(biāo)儀，雙波長450/630nm濾光片
2．精確的微量移液器（單道1-100ul、0.5-10ul、多道30-300ul）
3．水浴箱或恒溫箱
4．微量振蕩器
5．洗液吸移裝置
6．一次性槍頭（10ul，200ul）
7．去離子水
【樣本要求】
1．本試劑檢測的樣本為豬血清，樣本應(yīng)無菌采集，2℃～8℃貯存應(yīng)不超過一周，長期應(yīng)在-20℃以下保存。
2．避免使用嚴(yán)重溶血、有沉淀物、含懸浮纖維蛋白及污染長菌及含疊氮鈉血清樣本。
3．樣本中含有常規(guī)用量的EDTA、枸櫞酸鈉或肝素鈉等抗凝劑不影響本實(shí)驗(yàn)。
【實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備】
1．試劑盒組分回溫平衡:試劑盒組分在實(shí)驗(yàn)前，先取出置室溫30min，可以獲得最佳結(jié)果。.
2．樣本稀釋：用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本作40倍稀釋（即：5μl血清加195μl樣品稀釋液），混合均勻。
3．配制洗滌液：將試劑盒所提供濃縮洗滌液直接用去離子水稀釋20倍（即1ml濃縮洗滌液加19ml水），即可使用。注意：使用前要使結(jié)晶*溶解。
【檢驗(yàn)方法】
1．加樣：根據(jù)樣本數(shù)量，取所需板條，檢測時(shí)，設(shè)陰、陽性對照各2孔，分別加入不用稀釋的陰、陽性對照血清100μl于相應(yīng)孔中。其余為樣本孔，每孔加100μl用樣本稀釋液稀釋好的樣本（可做單孔也可雙孔檢驗(yàn)）。
2．溫育：加樣后，蓋上蓋板膜，置37℃溫育30分鐘。
3．洗板：甩去孔內(nèi)液體，用洗滌液注滿反應(yīng)板孔，靜置10秒，直接甩出，洗滌3次，最后一次洗滌后拍干板內(nèi)液體。
4．加酶：每孔加酶標(biāo)記物100μl。
5．溫育：加好酶標(biāo)記物的反應(yīng)板蓋好蓋板膜，置37℃溫育30分鐘。
6．洗板：同步驟3。
7．顯色：每孔加顯色劑100μl，振蕩混勻，37℃避光反應(yīng)10分鐘。
8．終止：每孔加終止液50μl，振蕩10秒，充分混勻，終止后即讀數(shù)。
9．讀數(shù)：以450nm/ 630nm雙波長檢測，讀取各孔吸光度值（OD值）。
【結(jié)果判定】
在酶標(biāo)儀上測各孔的OD值。檢測結(jié)果有效的條件是陽性對照孔的平均OD值≥1.0，陰性對照孔的平均OD值必須＜0.1；樣品中抗體存在與否，或樣本中抗體的相對水平的高低由S/P值決定，S/P值計(jì)算時(shí)按以下方式處理:
S/P=(樣本OD450/630值-NCx)/（PCx-NCx)，其中NCx表示陰性對照孔平均OD450/630值（0.05以下的數(shù)值按0.05計(jì)算），PCx表示陽性對照孔平均OD450/630值；
當(dāng)樣本的S/P≥0. 25時(shí)判為陽性；樣品S/P值＜0.25時(shí)判為陰性；
若進(jìn)行大量樣本檢測時(shí)，可使用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行分析數(shù)據(jù)結(jié)果，該軟件可登陸本公司網(wǎng)站下載。
【注意事項(xiàng)】
1．本試劑盒僅供研究使用。
2．不要使用過期的試劑盒組分，不要把不同批次的組分混合使用。
3．使用試劑盒之前，一定要仔細(xì)閱讀說明書。
4 使用前，濃縮的洗滌液應(yīng)恢復(fù)至室溫（20～25℃），并搖動(dòng)使沉淀溶解（最好在37℃水浴鍋中加熱5～10分鐘），然后用去離子水作20倍稀釋（例如：50ml的濃縮洗滌液加上950ml蒸餾水），混勻，稀釋好的洗滌液在2～8℃可以存放7-10日。
5．本試劑盒應(yīng)按含有傳染性材料對待，試驗(yàn)廢棄物應(yīng)經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘，或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。
6．微孔板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)在室溫中平衡。未用完的液體試劑應(yīng)蓋好瓶蓋，與其它配套組份放入試劑盒中于2℃-8℃避光保存。
7．應(yīng)用微量移液器加入樣本及試劑，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性。
8．加洗滌液時(shí)應(yīng)做到滿而不溢，防止孔口有游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染。
9．終止液有腐蝕性，若濺到皮膚或衣物上應(yīng)立即用大量清水沖洗干凈。
【儲(chǔ)存條件及有效期】
于2℃～8℃避光保存，防止冷凍，有效期12個(gè)月。
【生產(chǎn)日期及批號(hào)】
詳見包裝袋和外包裝盒。
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